CAR-T Подготовка клеток – Услуги и продукты по упаковке лентивирусов

В GeneMedi мы стремимся к новаторским достижениям в области генной терапии и иммунотерапии, с особым вниманием к сложному, но важному процессу подготовки клеток CAR-T с помощью упаковки лентивирусов. Процесс переноса генов в клетках CAR-T не является простой задачей, и можно столкнуться со многими трудностями, если не использовать разные векторы. Наиболее часто используемым из них является лентивирус (LV) благодаря широкому спектру специфичности хозяина, стабильности экспрессии генов и высокой эффективности в различных клетках млекопитающих. Наши лентивирусные векторы включают хорошо продуманные упаковочные функции, способные вмещать до 6. 5 kb экзогенных генов при минимальном уровне генотоксичности, что делает их идеальным решением для разработки высокоэффективных, сильных и стабильных CAR-T-клеток. Благодаря нашим глубоким знаниям упаковки лентивирусов и передовым технологиям GeneMedi, мы стремимся не только расширить эффективную и надежную клеточную терапию CAR-T, но и дать новое направление в лечении рака.



Услуги и продукты по упаковке лентивирусов для белков-мишеней CAR

Иммунотерапия – это еще одна область специализации, которой может похвастаться GeneMedi; предлагаемые услуги по упаковке лентивирусов являются весьма сложными и относятся к подготовке клеток CAR-T, каждая из которых тщательно разработана для нацеливания на важные белки, связанные с различными формами рака. Наш широкий спектр услуг включает архитектуру, оффшорные и аутсорсинговые решения для индивидуальной разработки высококачественных лентивирусных векторов для генетической модификации Т-клеток, чтобы они стали убийцами раковых клеток. Наши предлагаемые услуги по подготовке клеток CAR-T усиливают акцент на таких антигенах, как CD19, CD20, Her2, BCMA и GPC3, предоставляя не только решение, которое необходимо для исследований рака и стратегий лечения, но и решения, которые они требуют.

Лентивирусная упаковка в GPI выходит за рамки текущих стратегий генной терапии и позволяет исследователям создавать клетки CAR-T с эффективностью и точностью. Приверженность GeneMedi инновациям подчеркивается использованием современных векторных конструкций, которые обладают способностью обеспечивать максимальную экспрессию CAR, полное расширение Т-клеток и высокую и устойчивую противоопухолевую эффективность. Мы делаем упор на то, чтобы наши векторы были наилучшего качества и безопасны для использования при лечении некоторых из самых тяжелых раковых заболеваний, с которыми могут столкнуться практикующие врачи и исследователи. Наше видение – продвигать разработку более эффективных методов лечения рака, перемещая их от стадии исследований к доклиническим исследованиям, от них – к клиническим испытаниям и, наконец, к практическому применению благодаря надежным услугам по упаковке лентивирусов.


Название продукта Описание продукта Подробно
CD19 CAR-лентивирус Наш CD19 CAR-лентивирус специально разработан для нацеливания на CD19, критический маркер B-клеточных злокачественных новообразований. Этот вектор является краеугольным камнем в лечении различных лейкемий и лимфом, предлагая луч надежды пациентам, борющимся с этими заболеваниями. Подробности 
CD20 CAR-лентивирус Нацеливаясь на злокачественные новообразования CD20-positive, наш CD20 CAR-лентивирус создан для облегчения новаторских методов лечения таких состояний, как неходжкинская лимфома и хронический лимфоцитарный лейкоз, демонстрируя нашу приверженность борьбе с гематологическими раками. Подробности
Her2 CAR-лентивирус Наш Her2 CAR-лентивирус нацелен на белок Her2, предлагая стратегический подход к лечению Her2-положительного рака молочной железы. Этот вектор воплощает нашу приверженность продвижению персонализированной медицины и предоставлению таргетной терапии пациентам с раком молочной железы. Подробности
BCMA CAR-лентивирус Сфокусированный на BCMA, белке, вовлеченном в патогенез множественной миеломы, наш BCMA CAR-лентивирус подчеркивает нашу приверженность решению этой сложной проблемы с помощью таргетных терапевтических стратегий. Подробности
GPC3 CAR лентивирус Нацеливаясь на GPC3, ассоциированный с гепатоцеллюлярной карциномой, наш GPC3 CAR лентивирус отражает нашу приверженность новаторским методам лечения трудноизлечимых раков, подчеркивая наш инновационный подход к терапии рака. Подробности

В дополнение к этим специализированным услугам, GeneMedi оснащен для предоставления индивидуальных решений по упаковке лентивирусов, разработанных для достижения конкретных целей ваших исследовательских или терапевтических проектов.



Инструменты детекции CAR

GeneMedi по-прежнему стремится предоставлять превосходную услугу по подготовке клеток CAR-T вместе с множеством ценных наборов для детекции CAR, которые необходимы для точного подсчета и всестороннего исследования терапий клеток CAR-T. Представленный ассортимент предоставит как исследователям, так и клиницистам полный спектр реагентов и антител, необходимых для характеристики клеток CAR-T на каждом этапе процесса.

Для правильной детекции этих терапевтических клеток CAR-T портфель GeneMedi включает антитела, специфичные к различным частям конструкции CAR: scFv, шарнирный, трансмембранный и внутриклеточный сигнальные домены. Также предполагается, что с помощью этого ассортимента можно всесторонне изучить возможные изменения в экспрессии, сборке и функции CAR, чтобы понять, как клетки CAR-T ведут себя после инфузии и взаимодействуют с опухолевыми клетками.

Для прямого обнаружения экспрессии CAR антитела, используемые в этом методе, разработаны для специфического связывания новых эпитопов, которые являются частью scFv CAR, что позволяет оценить количество клеток CAR-T в кровотоке пациентов. Это важно для общей оценки клеток CAR-T и их устойчивости после лечения, что дает представление об успехе конкретного типа терапии.


Кат. № Название продукта Описание продукта Подробнее
GMLS-Tag003-Ab01 Моноклональное антитело Anti-G4S Linker Это антитело искусно создано для обнаружения линкера G4S в конструкциях CAR, обеспечивая надежный инструмент для мониторинга экспрессии CAR и гарантируя эффективность клеточных терапий CAR-T. Подробности
GTU-ADA-FMC63-Ab01~06 Моноклональное антитело Anti-FMC63 Специфически нацеливаясь на scFv FMC63, используемый в CAR-конструкциях CD19, это антитело играет решающую роль в оценке специфичности и функциональности клеток CD19-directed CAR-T, подчеркивая наше внимание к обеспечению точности в клеточной терапии CAR-T. Подробности 
GMLS-Tag002-Ab01 Моноклональное антитело против VHH Разработанное для распознавания VHH-доменов, это антитело является ключевым инструментом для обнаружения и анализа CAR-конструкций, содержащих VHH-домены. Оно обеспечивает высокоспецифичный и чувствительный способ проверки наличия и функциональности этих инновационных CAR-конструкций. Подробности 


Преимущества

Услуги по упаковке лентивирусов GeneMedi для подготовки клеток CAR-T отличаются рядом ключевых преимуществ, которые выделяют нас в области клеточной иммунотерапии:

  • Непревзойденная эффективность: Используемые нами лентивирусные векторы соответствуют высоким стандартам, что обеспечивает наивысшую эффективность трансдукции, необходимую для генетической модификации T-клеток с целью повышения их способности распознавать опухолевые клетки.

  • Долгосрочная стабильность: Наши лентивирусные векторы также обеспечивают стабильную и постоянную экспрессию CAR-гена, что обеспечивает последовательный ответ клеток CAR-T на целевые раковые клетки при повторном терапевтическом применении, что имеет решающее значение для достижения устойчивой трансформации.

  • Широкая применимость: Известно, что чистота лентивирусных векторов и целевых клеток высока, что позволяет использовать лентивирусные векторы в различных типах клеток. Эта универсальность особенно важна для поддержания разнообразных исследовательских и терапевтических возможностей в различных клеточных контекстах и заболеваниях.

  • Повышенная безопасность: Лентивирусные векторы от Safeful уделяют больше внимания безопасности, что приводит к низкой генотоксичности, что делает их предпочтительными для клинического и терапевтического использования. Стандарты качества, строго соблюдаемые в процессах производства нашей продукции, гарантируют их безопасность.

  • Настройка и поддержка: Понимая, что каждый клиент находится в поиске наиболее подходящего реагента для своих исследований, Max Bio предлагает настраиваемые варианты CAR-мишеней и векторов. Кроме того, наша опытная команда работает над созданием проектов, начиная от векторных конструкций до финальных услуг, чтобы адаптировать наши услуги под ваши исследовательские и терапевтические потребности.



Данные валидации

  • CAR лентивирус CD19
  • Инструменты обнаружения CAR
GM-Lenti-CAR Lentivirus

Рисунок 1. Лентивирус GM-Lenti-CAR демонстрирует отличную производительность в CAR-expression

FMC64 and G4S Linker antibody validation

Рисунок 2. GTU-ADA-FMC63-Ab01 и GMLS-Tag003-Ab-1 валидированы для обнаружения клеток CAR-NK.

FMC64 antibody validation

Рисунок 3. GTU-ADA-FMC63-Ab01 валидирован для обнаружения имитационных образцов инфузии CAR-NK у пациентов.

G4S Linker antibody validation

Рисунок 4. Для обнаружения клеток CAR-T фон детекции GMLS-Tag003-Ab-1 у GeneMedi ниже, а результаты обнаружения ближе к специфическому антигенному детектированию по сравнению с компанией C.

GMLS-Tag002-Ab01 эффективно обнаруживает экспрессию анти-Target CAR в формате VHH-based с высокой согласованностью с целевым белком


Целевой белок (антиген) обычно используется для обнаружения экспрессии анти-Target CAR. Например, рекомбинантный белок CD19 используется в качестве антигена для детекции процентного содержания CAR. Однако целевой белок уникален, дорог и труден в производстве. Анти-VHH антитело GeneMedi является универсальной стратегией для обнаружения экспрессии анти-Target CAR в формате VHH-based.

Клетки 293T были трансфицированы CAR-плазмидами, экспрессирующими VHH-антитела, специфичные к target1, target2, target3 и target4. После трансфекции экспрессия соответствующих CAR была подтверждена с использованием специфических рекомбинантных белков, GMLS-Tag002-Ab01 и коммерческого анти-VHH антитела (компания G).

Рекомбинантные белки использовались в качестве положительного контроля для оценки детекции CAR-positive. Статистический анализ использует соотношение положительного обнаружения GMLS-Tag002-Ab01 или анти-VHH антитела (компания G) относительно антигенной детекции. GMLS-Tag002-Ab01 достигает коэффициента согласованности, близкого к 1,0. Данные показывают, что уровень положительного обнаружения с GMLS-Tag002-Ab01 был сопоставим с антигенами, демонстрируя почти идентичную производительность с положительным контролем. В отличие от этого, анти-VHH антитело (компания G) показало более высокую или более низкую чувствительность обнаружения. Результаты указывают на то, что GMLS-Tag002-Ab01 эффективно обнаруживает экспрессированные VHH-антитела (нанотела, биспецифические антитела VHH-based) на клетках CAR-transfected 293T с высокой точностью, сопоставимой с рекомбинантными белками. Это устанавливает GMLS-Tag002-Ab01 как надежный инструмент для обнаружения экспрессии CAR в аналогичных экспериментах.

VHH ELISA Validation

Рисунок 5. GMLS-Tag002-Ab01 эффективно оценивает экспрессию анти-Target нанотела (VHH) на клетках CAR-transfected 293T с более высокой специфичностью в проточной цитометрии.

A. Точечная диаграмма показывает интенсивность флуоресценции клеток CAR-expressing 293T, окрашенных GMLS-Tag002-Ab01, анти-VHH антителом (компания G) и специфическим рекомбинантным целевым белком (положительный контроль).

B. Анти-VHH антитело GeneMedi показывает высокую согласованность с антигенной стратегией оценки в контроле качества CAR-экспрессирующих клеток формата VHH-based. Статистический анализ использует соотношение положительного обнаружения GMLS-Tag002-Ab01 или анти-VHH антитела от компании G относительно детекции на основе целевого белка.



Информация

В GeneMedi мы стремимся к пионерским достижениям в генной терапии и иммунотерапии, с особым вниманием к сложному, но важному процессу подготовки клеток CAR-T с помощью упаковки лентивируса. Перенос генов в клетки CAR-T — нелегкая задача, и существует вероятность столкнуться со многими проблемами, если не использовать различные векторы. Наиболее часто используемым из них является лентивирус (LV) из-за широкого спектра специфичности хозяина, стабильности экспрессии генов и высокой эффективности в различных клетках млекопитающих. Наши лентивирусные векторы включают хорошо продуманные функциональные возможности упаковки, способные удерживать до 6. 5 kb экзогенных генов при минимальном уровне генотоксичности, что делает их идеальным решением для разработки высокоэффективных, сильных и стабильных CAR-T-клеток. Благодаря нашим глубоким знаниям в области упаковки лентивирусов и передовым технологиям GeneMedi, мы стремимся не только расширить эффективные и надежные клеточные терапии CAR-T, но и предоставить новое направление для лечения рака.

Этапы процесса клеточной терапии рака CAR-T:

  1. Лейкаферез: Этот процесс начинается с лейкафереза, который включает забор крови пациента и пропускание ее через аппарат, выделяющий и извлекающий Т-клетки. Остальные компоненты крови возвращаются в кровеносную систему пациента через те же вены.

  2. Перепрограммирование: После этого Т-клетки генетически модифицируются в лабораторных условиях с помощью методов генной инженерии. Используется лентивирусный вектор для трансдукции Т-клеток с целью внедрения генетической последовательности, которая позволит им экспрессировать CAR — рецепторы, которые будут построены на поверхности Т-клеток.

  3. CAR-T-клетки: Эти генетически модифицированные Т-клетки теперь будут называться клетками CAR-T, чтобы обозначить, что они запрограммированы на связывание с определенными мишенями, называемыми антигенами, обнаруженными на поверхности раковых клеток. На этом этапе клетки CAR-T активируются при идентификации раковых клеток.

  4. Экспансия: Эти клетки CAR-T затем выращиваются в лаборатории, чтобы они могли размножаться и увеличивать свою численность. Эта фаза экспансии важна для культивирования и развития миллионов таких клонов клеток CAR-T для повторной инъекции тому же пациенту.

  5. Кондиционирование: Перед инфузией клеток CAR-T пациент должен пройти кондиционирование, обычно с помощью химиотерапии. Этот этап способствует подготовке организма к принятию клеток CAR-T путем опустошения ниш иммунной системы, что улучшает пролиферацию и выживание вводимых в организм клеток.

  6. Введение: Клетки CAR-T, размноженные после кондиционирования рецепторов, затем вводятся пациенту. Введенные клетки будут нацелены на опухолевые клеточные линии, специфичные для данного пациента. Затем они размножаются и образуют особые клетки, которые перемещаются по телу пациента с целью уничтожения этих раковых клеток.

  7. Мониторинг: После инфузии пациент нуждается в тщательном наблюдении с целью контроля возможных побочных эффектов, которые могут проявиться, а также для определения влияния лечения. Это необходимо для безопасности пациентов, особенно в отношении возможных изменений в плане лечения.

Picture loading failed.

Рисунок 1: Весь процесс клеточной терапии CAR-T, от лейкаферезиса до мониторинга, обычно занимает 4-5 недель. Каждый этап важен для успеха этого персонализированного подхода к лечению, дающего надежду пациентам с определенными типами рака.

Химерные антигенные рецепторы (CAR) представляют собой сконструированные рецепторные белки, которые придают определенную функцию эффекторной иммунной клетке. В большинстве традиционных CAR домен, отвечающий за нацеливание, состоит из одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv), образованного из вариабельных областей тяжелых и легких цепей антител, организованных в единый связывающий интерфейс.

Однако прогресс в этой области стимулировал исследования для создания новых форм CAR-конструкций для распознавания антигенов, не содержащих scFv. Некоторые передовые конструкции включают использование антител наименьшей формы, известных как нанотела. Это по сравнению с другими типами антител, которые, хотя и дают аналогичные или даже лучшие результаты, имеют недостатки, такие как большой размер и нестабильность.

Другой тип белков, обычно используемых в современных CAR-конструкциях, — это так называемые конструированные анкириновые повторяющиеся белки (DARPin). DARPin — это небольшие калориметрические белки, которые используются в многоцелевых аффинных матрицах и легко конструируются и экспрессируются для селективного связывания с целевым антигеном.

Кроме того, некоторые CAR-конструкции включают лиганды или целые рецепторы, которые обычно прикрепляются к соответствующему антигену. Такой подход потенциально может повысить специфичность клеток CAR-T и уменьшить мобилизацию клеток CAR-T в другие ткани.

При более разнообразном нацеливании на антигены это создаст преимущество в оптимизации конструкций CAR и повысит безопасность и эффективность клеток CAR-T, что делает их применимыми для лечения различных типов рака.

Picture loading failed.

Рисунок 2: В большинстве CAR-конструкций модуль нацеливания состоит из одноцепочечного вариабельного фрагмента (scFv). Новые CAR-конструкции могут также содержать нанотела, конструированные анкириновые повторяющиеся белки (DARPin), лиганды или рецепторы вместо scFv для распознавания мишени.